CyTOF 质谱流式单细胞蛋白检测-不朽情缘

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CyTOF 质谱流式单细胞蛋白检测

质谱流式技术催化了单细胞蛋白质组学的革命，是基于荧光流式的改良技术（Fig 1）。用重金属同位素标签代替传统流式荧光标签，利用质谱技术检测单个细胞全部待测Marker丰度与类型。
该技术的应用一方面使流式检测通道数量大幅提高到40+，提升了单个样品获得的信息量；另一方面避免了通道间信号的干扰，大大简化了实验设计，提升了数据的可靠性。
通道的增加意味着可以对细胞亚型进行更精准的分群，也意味着可以对细胞内信号通路进行更加全面的分析；单次实验可捕获百万级别的单细胞，避免遗漏稀有亚群。
广度和深度的综合，适用于各种情况下生理，病理单细胞表型、信号通路及功能等研究。使得质谱流式成为单细胞水平蛋白组学研究不可或缺的工具。

Fig 1 质谱流式示意图

灵敏度高、应用范围广

Starion 质谱流式系统对信号分辨率极高，可同时检测40+不同的标签。质谱流式可以同时获得单细胞表面 Marker、胞内信号通路、转录因子、细胞因子、细胞周期等等各方面的信息，在造血、免疫、干细胞、癌症以及药物筛选等多个领域的研究中有着广泛的应用。

科学方案设计

从抗体 Panel 设计到数据分析，每一步都经过科学、缜密的设计，以保障高质量研究成果。

常见问题

1. 传统流式和质谱流式有哪些不同之处？
（1）标签系统的不同：前者主要使用各种荧光基团作为抗体的标签，后者则使用各种金属元素作为标签。
（2）检测系统的不同：前者使用激光器和光电倍增管作为检测手段，而后者使用 ICP 质谱技术作为检测手段。
2. 质谱流式比传统流式有哪些优势？
（1）通道数量增加到上百个。ICP 质谱装置具有非常宽的原子量检测范围（75~209 Da），可以同时检测上百个不同的参数。（2）通道间无干扰，无需计算补偿。
（3）采用独特的金属标签抗体。由于细胞本身不含这些作为标签的金属元素，没有传统流式的“自发荧光”，因此信号背景极低。
（4）多样化的数据处理方式，实现对样品的深入分析。
3. 质谱流式的样本如何制备？
质谱流式技术所需样本为单细胞悬液。下面的制备流程以 PBMC 为例：
（1）PBMC 细胞分离。推荐用肝素或者柠檬酸盐作为抗凝剂抽提全血，并在4小时内使用Ficoll 或者 Percol 密度梯度离心法分离出 PBMC。注意需要尽量去除红细胞；
（2）顺铂染色。顺铂可用于区分死活细胞，推荐加入1 uL 终浓度为5 uM 的顺铂，37℃孵育5分钟后加入2~5倍体积的 Cell Staining Buffer，中止反应。其后以300 g的转速离心5分钟，
弃上清后使用 Cell Staining Buffer 或细胞培养基重悬细胞；
（3）细胞刺激（可选）。将细胞转入培养箱培养15~30 min，随后使用相应刺激物进行分组刺激。刺激后的细胞转至离心管，离心后使用 Cell Staining Buffer 稀释至1 mL；
注：此步根据具体需要，短时间的信号通路刺激可以按上述步骤进行；如果做数小时的胞内 Cytokine，该步骤应该放在染顺铂之前。
（4）细胞固定。使用2× 的 fixation buffer（含3.2% PFA 的 PBS）进行固定；
（5）将固定后的样品保存在-80℃。

更详细的制备步骤请咨询当地销售