蛋白质芯片-常见问题-不朽情缘

不朽情缘

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蛋白质芯片

常见问题

Q：哪些样本可用于蛋白质芯片？
血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液等常见样本均可。
除了这些常见的样品，使用蛋白质芯片检测成功的特殊样品还有尿液、眼泪、唾液、痰、脑脊液、前列腺液、腹腔注射液、奶水、初乳、支气管肺泡灌洗液、脓肿液、中耳液、血小板释放物、骨头裂解液、精浆液、卵泡液、囊泡液等。
目前有发表文献测试过的组织裂解液有肺、支气管、子宫内膜组织，肝脏组织，宫颈肿瘤、脾、脑组织，宫颈组织、囊肿组织等。
Q：如何收集蛋白质芯片的样本？
血清：收集全血至普通离心管或者采血管（不含抗凝剂、防腐剂或者分离剂），室温放置30~45 min，以 3,000~5,000 rpm/min 离心 10 min，取上清检测或者冻存（-80℃）。
血浆：收集全血至 EDTA、肝素、或者枸橼酸钠等处理的真空采血管，以 3,000~5,000 rpm/mL 离心 10 min，取上清检测或者冻存（-80℃）。
尿液：收集不添加稳定剂的尿液样本，高速离心样本（如 10,000 离心 1 min 或 5,000 离心 2 min），取上清分装，利用干冰或甲醇浴使样本迅速结冻，储存于 -80℃备用。
细胞上清（条件培养基）：血清中含有部分细胞因子，所以建议制备无血清或低血清条件培养基。例如，于培养皿或培养板中加入完全培养基，接种细胞；细胞贴壁后，加入含药物的6~8 mL 无血清或低血清（低于 2% 胎牛血清）培养基作用细胞；待药物作用时间点到达时，确保细胞融合度达到 90% 以上，收集培养上清于 15 mL 离心管中，2,000 rpm、4℃离心 10 min，收集上清，分装于 1.5 mL EP 管，储存于 -80℃中。对于细胞上清的检测，不同组之间需要接种同样数量的细胞、加入同样体积培养基，培养同样时间后收集样品。
细胞裂解液：待药物作用时间点到达时，确保细胞融合度达到 90% 以上（数量约为106~108），将上清吸掉，用 PBS（4℃）清洗 2 次细胞，加入 150~200 μL 细胞裂解液（或者参照您购买的裂解液说明书），快速将细胞从培养板刮下，收集细胞裂解液，加入微量离心管中，冰浴 30 min，期间每 10 min 使用涡旋器涡旋 30 s。或者吸弃上清，用 PBS 洗涤细胞 2次后，加入 PBS 刮落细胞，收集于离心管中，2,000~3,000 rpm 4℃离心 10 min，弃上清。加入 100~150 μL 细胞裂解液，冰浴 30 min，期间每 10 min 使用涡旋器涡旋 30 s。14,000 rpm 4℃离心混合液 10 min，吸取清澈上清于干净的离心管中（确保只吸取上层清澈细胞上清，如果上清出现絮状或者浑浊，将细胞裂解液上清转入干净的离心管中，于 14,000 rpm 4℃再次离心 15~20 min 后取上清）。建议裂解蛋白浓度至少 2 mg/mL 以上，上样时稀释倍数约 5~10 倍，上样浓度建议为 500 μg/mL。
组织裂解液：将组织切成小块，转移至 2 mL 离心管，建议 100 mg 组织加入 500 μL 裂解液（或者参照您购买的裂解液说明书），使用研浆机将组织打碎，冰浴 14,000 rpm 4℃离心混合液 15~20 min，将上清转入干净的离心管中（确保只吸取顶层清澈上清，如果上清出现絮状或者浑浊，将上清转入干净的离心管中，14,000 rpm 4℃再次离心 15~20 min 后取上清）。
Q：蛋白质芯片有哪些类型？
蛋白质芯片所涉及的领域和方向非常多，部分方向可参考下表。